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滅菌的辦法

滅菌法系指用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中活的微生物殺滅或除去,從而使物品殘存活微生物的概率下降**預(yù)期的無菌保證水平的方法。本法適用于制劑、原料、輔料及醫(yī)療器械等物品的滅菌。 
無菌物品是指物品中不含任何活的微生物。對于任何一批滅菌物品而言,**無菌無法保證,也無法用試驗(yàn)來證實(shí)。一批物品的無菌特性只能相對地通過物品中活微生物的概率低**某個可接受的水平來表述,即無菌保證水平(Sterility assurance level,簡稱SAL)。實(shí)際生產(chǎn)過程中,滅菌是指將物品中污染微生物的概率下降**預(yù)期的無菌保證水平。**終滅菌的物品微生物存活概率,即無菌保證水平不得高于10-6。已滅菌物品達(dá)到的無菌保證水平可通過驗(yàn)證確定。 
滅菌物品的無菌保證不能依賴于**終產(chǎn)品的無菌檢驗(yàn),而是取決于生產(chǎn)過程中采用合格的滅菌工藝、嚴(yán)格的GMP管理和良好的無菌保證體系。滅菌工藝的確定應(yīng)綜合考慮被滅菌物品的性質(zhì)、滅菌方法的有效性和經(jīng)濟(jì)性、滅菌后物品的完整性和穩(wěn)定性等因素。 
滅菌程序的驗(yàn)證是無菌保證的必要條件。滅菌程序經(jīng)驗(yàn)證后,方可交付正式使用。驗(yàn)證內(nèi)容包括: 
(1)撰寫驗(yàn)證方案及制定評估標(biāo)準(zhǔn)。 
(2)確認(rèn)滅菌設(shè)備技術(shù)資料齊全、安裝正確,并能處于正常運(yùn)行(安裝確認(rèn))。 (3)確認(rèn)滅菌設(shè)備、關(guān)鍵控制和記錄系統(tǒng)能在規(guī)定的參數(shù)范圍內(nèi)正常運(yùn)行(運(yùn)行確認(rèn))。 
(4)采用被滅菌物品或模擬物品按預(yù)定滅菌程序進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn),確認(rèn)各關(guān)鍵工藝與參數(shù)符合預(yù)定標(biāo)準(zhǔn),確定經(jīng)滅菌物品的無菌保證水平符合規(guī)定(性能確認(rèn))。 
(5)匯總并完善各種文件和汜錄,撰寫驗(yàn)證報(bào)告。 
日常生產(chǎn)中,應(yīng)對滅菌程序的運(yùn)行情況進(jìn)行監(jiān)控,確認(rèn)關(guān)鍵參數(shù)(如溫度、壓力、時間、濕度、滅菌氣體濃度及吸收的輻照劑量等)均在驗(yàn)證確定的范圍內(nèi)。滅菌程序應(yīng)定期進(jìn)行再驗(yàn)證。當(dāng)滅菌設(shè)備或程序發(fā)生變更(包括滅菌物品裝載方式和數(shù)量的改變)時,應(yīng)進(jìn)行再驗(yàn)證。 
物品的無菌保證與滅菌工藝、滅菌前物品被污染的程度及污染菌的特性相關(guān)。因此,應(yīng)根據(jù)滅菌工藝的特點(diǎn)制定滅菌物品滅菌前的微生物污染水平及污染菌的耐受限度并進(jìn)行監(jiān)控,并在生產(chǎn)的各個環(huán)節(jié)采取各種措施降低污染,確保微生物污染控制在規(guī)定的限度內(nèi)。 
滅菌的冷卻階段。應(yīng)采取措施防止已滅菌物品被再次污染。任何情況下,都應(yīng)要求容器及其密封系統(tǒng)確保物品在有效期內(nèi)符合無菌要求。 
滅菌方法 
常用的滅菌方法有濕熱滅菌法、干熱滅菌法、輻射滅菌法、氣體滅菌法和過濾除菌法??筛鶕?jù)被滅菌物品的特性采用一種或多種方法組合滅菌。只要物品允許,應(yīng)盡可能選用**終滅菌法滅菌。若物品不適合采用**終滅菌法,可選用過濾除菌法或無菌生產(chǎn)工藝達(dá)到無菌保證要求,只要可能,應(yīng)對非**終滅菌的物品作補(bǔ)充性滅菌處理(如流通蒸汽滅菌)。 
一、濕熱滅菌法 
本法系指將物品置于滅菌柜內(nèi)利用高壓飽和蒸汽,過熱水噴淋等手段使微生物菌體中的蛋白質(zhì)、核酸發(fā)生變性而殺滅微生物的方法。該法滅菌能力強(qiáng).為熱力滅菌中**有效、應(yīng)用**廣泛的滅菌方法。藥品、容器、培養(yǎng)基、無菌衣、膠塞以及其他遇高溫和潮濕不發(fā)生變化或損壞的物品。均可采用本法滅菌。流通蒸汽不能完全殺滅細(xì)菌孢子,一般可作為不耐熱無菌產(chǎn)品的輔助滅菌手段。 
濕熱滅菌條件的選擇應(yīng)考慮滅菌物品的熱穩(wěn)定性、熱穿透力、微生物污染程度等因素。濕熱滅菌條件通常采用121℃×15min、121℃×30min或116℃×40min的程序,也可采用其他溫度和時間參數(shù),但無論采用何種滅菌溫度和時間參數(shù),都必須證明所采用的滅菌工藝和監(jiān)控措施在正常運(yùn)行過程中能確保物品滅菌后的SAL≤10-6。當(dāng)滅菌程序的選定采用F0值概念時(F0值為標(biāo)準(zhǔn)滅菌時間,系滅菌過程賦予被滅菌物品121℃下的滅菌時間),應(yīng)采取特別措施確保被滅菌物品能得到足夠的無菌保證,此時,除對滅菌程序進(jìn)行驗(yàn)證外,還必須在生產(chǎn)過程中對微生物進(jìn)行監(jiān)控,證明污染的微生物指標(biāo)低于設(shè)定的限度。對熱穩(wěn)定的物品,滅菌工藝可**過度殺滅法,以保證被滅菌物品獲得足夠的無菌保證值。熱不穩(wěn)定性物品,其滅菌工藝的確定依賴于在一定的時間內(nèi),一定的生產(chǎn)批次的被滅菌物品滅菌前微生物污染的水平及其耐熱性。因此,日常生產(chǎn)全過程應(yīng)對產(chǎn)品中污染的微生物進(jìn)行連續(xù)地、嚴(yán)格地監(jiān)控.并采取各種措施降低物品微生物污染水平,特別是防止耐熱菌的污染。熱不穩(wěn)定性物品的F0值一般不低干8min。 
采用濕熱滅菌時,被滅菌物品應(yīng)有適當(dāng)?shù)难b載方式,不能排列過密,以保證滅菌的有效性和均一性。 
濕熱滅菌法應(yīng)確認(rèn)滅菌柜在不同裝載時可能存在的冷點(diǎn)。當(dāng)用生物指示劑進(jìn)一步確認(rèn)滅菌效果時,應(yīng)將其置于冷點(diǎn)處。水法常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus stearothermophilus)。 
二、干熱滅菌法 
本法系指將物品置于干熱滅菌柜、隧道滅菌器等設(shè)備中,利用干熱空氣達(dá)到殺滅微生物或消除熱原物質(zhì)的方法。適用于耐高溫但不宜用濕熱滅菌法滅菌的物品滅菌,如玻璃器具、金屬制容器、纖維制品、固體試藥、液狀石蠟等均可采用本法滅菌。 #p#分頁標(biāo)題#e#
干熱火菌條件一般為160~170℃×120min以上、170~l80℃×60min以上或250℃×45min以上,也可采用其他溫度和時間參數(shù)。無論采用何種滅菌條件,均應(yīng)保證滅菌后的物品的SAL≤10-6。采用干熱過度殺滅后的物品一般無需進(jìn)行滅菌前污染微生物的測定。250℃×45min的干熱滅菌也可除去無菌產(chǎn)品包裝容器及有關(guān)生產(chǎn)灌裝用具中的熱原物質(zhì)。 
采州干熱滅菌時,被滅菌物品應(yīng)有適當(dāng)?shù)难b載方式,不能排列過密,以保證滅菌的有效性和均一性。 
干熱滅菌法應(yīng)確認(rèn)滅菌柜中的溫度分布符合設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)及確定**冷點(diǎn)位置等。常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus subtilis)。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)是證明除熱原過程有效性的試驗(yàn)。一般將不小于1000單位的細(xì)菌內(nèi)毒素加入待去熱原的物品中,證明該去熱原工藝能使內(nèi)毒素**少下降3個對數(shù)單位。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)所用的細(xì)菌內(nèi)毒素一般為大腸埃希菌內(nèi)毒素(Escherichia coliendoxin)。 
三、輻射滅菌法 
本法系指將物品置于適宜放射源輻射的γ射線或適宜的電子加速器發(fā)生的電子束中進(jìn)行電離輻射而達(dá)到殺滅微生物的方法。本法**常用的為
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Co-γ射線
輻射滅菌。醫(yī)療器械、容器、生產(chǎn)輔助用品、不受輻射破壞的原料藥及成品等均可用本法滅菌。 
采用輻射滅菌法滅菌的無菌物品其SAL應(yīng)≤10-6。γ射線輻射滅菌所控制的參數(shù)主要是輻射劑量(指滅菌物品的吸收劑量)。泫劑量的制定應(yīng)考慮滅菌物品的適應(yīng)性及可能污染的微生物**大數(shù)量及**強(qiáng)抗輻射力,事先應(yīng)驗(yàn)證所使用的劑量不影響被滅菌物品的安全性、有效性及穩(wěn)定性。常用的輻射滅菌吸收劑量為25kGy。對**終產(chǎn)品,原料藥、某些醫(yī)療器材應(yīng)盡可能采用低輻射劑量滅菌。滅菌前,應(yīng)對被滅菌物品微生物污染的數(shù)量和抗輻射強(qiáng)度進(jìn)行測定,以評價滅菌過程賦予該滅菌物品的無菌保證水平。對于已設(shè)定的劑量,應(yīng)定期審核,以驗(yàn)證其有效性。 
滅菌時,應(yīng)采用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)或物理方法對滅菌物品吸收的輻射劑量進(jìn)行監(jiān)控。以充分證實(shí)滅菌物品吸收的劑量是在規(guī)定的限度內(nèi)。如采用與滅菌物品一起被輻射的放射性劑量計(jì),劑量計(jì)要置于規(guī)定的部位。在初安裝時劑量計(jì)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)源進(jìn)行校正,并定期進(jìn)行再校正。 
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Co-γ射線輻射滅菌法常用的生物指示劑為短小芽孢桿菌孢子(Spores of 
Bacillus pumilus)。 
四、氣體滅菌法 
本法系指用化學(xué)消毒劑形成的氣體殺滅微生物的方法。常用的化學(xué)消毒劑有環(huán)氧乙烷、氣態(tài)過氧化氫、甲醛、臭氧(O3)等,本法適用于在氣體中穩(wěn)定的物品滅菌。采用氣體滅菌法時,應(yīng)注意滅菌氣體的可燃可爆性、致畸性和殘留毒性。 
本法中**常用的氣體是環(huán)氧乙烷,一般與80%~90%的惰性氣體混合使用,在充有滅菌氣體的高壓腔室內(nèi)進(jìn)行。該法可用于醫(yī)療器械,塑料制品等不能采用高溫滅菌的物品滅菌。含氯的物品及能吸附環(huán)氧乙烷的物品則不宜使用本法滅菌。 
采用環(huán)氧乙烷滅菌時,滅菌柜內(nèi)的溫度、濕度、滅菌氣體濃度、滅菌時間是影響滅菌效果的重要因數(shù)??刹捎孟铝袦缇鷹l件: 
    溫度              54℃±10℃     相對濕度          60%±10%     滅菌壓力          8×105Pa     滅菌時間          90min 
滅菌條件應(yīng)予驗(yàn)證。滅菌時,將滅菌腔室抽成真空,然后通入蒸汽使腔室內(nèi)達(dá)到設(shè)定的溫濕度平衡的額定值,再通入經(jīng)過濾和預(yù)熱的環(huán)氧乙烷氣體。滅菌過程中,應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控腔室的溫度、濕度、壓力、環(huán)氧乙烷濃度及滅菌時間。必要時使用生物指示劑監(jiān)控滅菌效果。本法滅菌程序的控制具有一定難度,整個滅菌過程應(yīng)在技術(shù)熟練人員的監(jiān)督下進(jìn)行。滅菌后,應(yīng)采取新鮮空氣置換,使殘留環(huán)氧乙烷和其他易揮發(fā)性殘留物消散。并對滅菌物品中的環(huán)氧乙烷殘留物和反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行監(jiān)控,以證明其不超過規(guī)定的濃度,避免產(chǎn)生毒性。    · 
采用環(huán)氧乙烷滅菌時,應(yīng)進(jìn)行泄漏試驗(yàn),以確認(rèn)滅菌腔室的密閉性。滅菌程序確認(rèn)時,還應(yīng)考慮物品包裝材料和滅菌腔室巾物品的排列方式對滅菌氣體的擴(kuò)散和滲透的影響。生物指示劑一般采用枯草芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus subtilis)。 
五、過濾除菌法 
本法系利用細(xì)菌不能通過致密具孔濾材的原理以除去氣體或液體中微生物的方法。常用于氣體、熱不穩(wěn)定的藥品溶液或原料的除菌。 
除菌過濾器采用于孔徑分布均勻的微孔濾膜作過濾材料,微孔濾膜分親水性和疏水性兩種。濾膜材質(zhì)依過濾物品的性質(zhì)及過濾目的而定。約品牛產(chǎn)十采用的除菌濾膜孔徑一般不超過0.22μm。過濾器的孔徑定義來自過濾器對微生物的截留,而非平均孔徑的分布系數(shù)。所以,用于**終除菌的過濾器必須選擇具有截流實(shí)驗(yàn)證明的除菌級過濾器。過濾器對濾液的吸附不得影響藥品質(zhì)量,不得有纖維脫落,禁用含石棉的過濾器。過濾器的使用者應(yīng)了解濾液過濾過程中的析出物#p#分頁標(biāo)題#e#性質(zhì)、數(shù)量并評估其毒性影響。濾器和濾膜在使用前應(yīng)進(jìn)行潔凈處理,并用高壓蒸汽進(jìn)行滅菌或作在線滅菌。更換品種和批次應(yīng)先清洗濾器,再更換濾芯或?yàn)V膜或直接更換濾器。 
過濾過程中無菌保證與過濾液體的初始生物負(fù)荷及過濾器的對數(shù)下降值LRV(log reduction value)有關(guān)。LRV系指規(guī)定條件下.被過濾液體過濾前的微生物數(shù)量與過濾后的微生物數(shù)量比的常用對數(shù)值。 
即:    LRV=lgN0-lgN 
式中   N0為產(chǎn)品除菌前的微生物數(shù)量。        N為產(chǎn)品除菌后的微生物數(shù)量。 
LRV用于表示過濾器的過濾除菌效率,對孔徑為0.22μm的過濾器而言,要求每1cm2有效過濾面積的LRV應(yīng)不小于7。因此過濾除菌時,被過濾產(chǎn)品總的污染量應(yīng)控  制在規(guī)定的限度內(nèi)。為保證過濾除菌效果,可使用兩個除菌級的過濾器串連過濾,或在灌裝前用過濾器進(jìn)行再次過濾。 
在過濾除菌中,一般無法對全過程中過濾器的關(guān)鍵參數(shù)(濾膜孔徑的大小及分布,濾膜的完整性及LRV)進(jìn)行監(jiān)控。因此,在每一次過濾除菌前后均應(yīng)作濾器的完整性試驗(yàn),即氣泡點(diǎn)試驗(yàn)或壓力維持試驗(yàn)或氣體擴(kuò)散流量試驗(yàn),確認(rèn)濾膜在除菌過濾過程中的有效性和完整性。完整性的測試標(biāo)準(zhǔn)來自于相關(guān)細(xì)菌載留實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。除菌過濾器的使用時間應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證,一般不應(yīng)超過一個工作日,否則應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。 
過濾除菌法常用的生物指示劑為缺陷假單胞菌(Pseudomonas diminuta)。 通過過濾除菌法達(dá)到無菌的產(chǎn)品應(yīng)嚴(yán)密臨控其生產(chǎn)環(huán)境的潔凈度,應(yīng)在無菌環(huán)境下進(jìn)行過濾操作。相關(guān)的設(shè)備、包裝容器、塞子及其他物品應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行滅菌,并防止再污染。 
六、無菌生產(chǎn)工藝 
無菌生產(chǎn)工藝系指必須在無菌控制條件下生產(chǎn)無菌制劑的方法,無菌分裝及無菌凍干是**常見的無菌生產(chǎn)工藝。后者在工藝過程中須采用過濾除菌法。 
無菌生產(chǎn)工藝應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控其生產(chǎn)環(huán)境的潔凈度,并應(yīng)在無菌控制的環(huán)境下進(jìn)行過濾操作。相關(guān)的設(shè)備、包裝容器、塞子及其他物品應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行滅菌。并防止被再次污染。 
無菌生產(chǎn)工藝過程的無菌保證應(yīng)通過培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)驗(yàn)證。在生產(chǎn)過程中,應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控生產(chǎn)環(huán)境的無菌空氣質(zhì)量、操作人員的素質(zhì)、各物品的無菌性。 
無菌生產(chǎn)工藝應(yīng)定期進(jìn)行驗(yàn)證.包括對環(huán)境空氣過濾系統(tǒng)有效性驗(yàn)證及培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。 
生物指示劑 
生物指示劑系一類特殊的活微生物制品,可用于確認(rèn)滅菌設(shè)備的性能、滅菌程序的驗(yàn)證、生產(chǎn)過程滅菌效果的監(jiān)控等。用于滅菌驗(yàn)證中的生物指示劑一般是細(xì)菌的孢子。 
1.制備生物指示劑用微生物的基本要求 
不同的滅菌方法使用不同的生物指示劑,制備生物指示劑所選用的微生物必須具備以下特性: 
(1)菌種的耐受性應(yīng)大于需滅菌產(chǎn)品中所有可能污染菌的耐受性。 (2)菌種應(yīng)無致病性。 
(3)菌株應(yīng)穩(wěn)定。存活期長,易于保存。 
(4)易于培養(yǎng)。若使用休眠孢子,生物指示劑中休眠孢子含量要在90%以上。 2.生物指示劑的制備 
生物指示劑的制備應(yīng)按一定的程序進(jìn)行,制備前,需先確定所用微生物的特性,如D值(微生物的耐熱參數(shù),系指一定溫度下,將微生物殺滅90%所需的時間,以分鐘表示)等。菌株應(yīng)用適官的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)物應(yīng)制成懸浮液,其中孢子的數(shù)量應(yīng)占優(yōu)勢,孢子應(yīng)懸浮于無營養(yǎng)的液體中保存。 
生物指示劑中包含一定數(shù)量的一種或多種孢子。可制成多種形式。通常是將一定數(shù)量的孢子附著在惰性的載體上,如濾紙條、玻片、不銹鋼、塑料制品等:孢子懸浮液也可密封于安瓿中;有的生物指示劑還配有培養(yǎng)基系統(tǒng)。D值除與滅菌條件相關(guān)外,還與微生物存在的環(huán)境有關(guān)。因此,一定形式的生物指示劑制備完成后,應(yīng)測定D值和孢子總數(shù)。生物指示劑應(yīng)選用合適的材料包裝,并設(shè)定有效期。載體和包裝材料在保護(hù)生物指示劑不致污染的同時,還應(yīng)保證滅菌劑穿透并能與生物指示劑充分接觸。載體和包裝的設(shè)計(jì)·原則是便于貯存、運(yùn)輸、取樣、轉(zhuǎn)移接種。 
有些生物指示劑可直接將孢子接種**液體滅菌物或具有與其相似的物理和化學(xué)特性的替代品中。使用替代品時,應(yīng)用數(shù)據(jù)證明二者的等效性。 
3.生物指示劑的應(yīng)用 
在滅菌程序的驗(yàn)證中,盡管可通過滅菌過程某些參數(shù)的監(jiān)控來評估滅菌效果,但生物指示劑的被殺滅程度,則是評價一個滅菌程序有效性**直觀的指標(biāo)??墒褂檬惺鄣臉?biāo)    準(zhǔn)生物指示劑,也可使用由日常生產(chǎn)污染菌監(jiān)控中分離耐受性**強(qiáng)的微生物制備的孢子。在生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)中,需確定孢子在實(shí)際滅菌條件下的D值,并測定孢子的純度和數(shù)量。驗(yàn)證時,生物指示劑的微生物用量應(yīng)比日常檢出的微生物污染量大,耐受性強(qiáng),以保證滅菌程序有更大的安全性。在**終滅菌法中,生物指示劑應(yīng)放任滅菌柜的不同部位。并避免指示劑直接接觸到被滅菌物品。生物指示劑按設(shè)定的條件滅菌后取出,分別置培養(yǎng)基中培養(yǎng),確定生物指示劑中的孢子是否被完全殺滅。 #p#分頁標(biāo)題#e#
過度殺滅產(chǎn)品滅菌驗(yàn)證一般不考慮微生物污染水平,可采用市售的生物指示劑。對滅菌手段耐受性差的產(chǎn)品,設(shè)計(jì)滅菌程序時,根據(jù)經(jīng)驗(yàn)預(yù)計(jì)在該生產(chǎn)工藝中產(chǎn)品微生物污染的水平,選擇生物指示劑的菌種和孢子數(shù)量。這類產(chǎn)品的無菌保證應(yīng)通過監(jiān)控每批滅菌前的微生物污染的數(shù)量、耐受性和滅菌程序驗(yàn)證所獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行評估。 
4.常用生物指示劑 
(1)濕熱滅菌法  濕熱滅菌法**常用的牛物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus stearothermophilus,如NCTC 10007、NCIMB 8157、ATCC 7953)。D值為1.5~  3.0min,每片(或每瓶)活孢子數(shù)5×105~5×106個,在121℃、19min下應(yīng)被完全殺滅。此外,還可使用生孢梭菌孢子(Spores of Clostridium sporogenes,如NCTC 8594、NCIMB 8053、ATCC 7955),D值為0.4~0.8min。(2)干熱滅菌法  干熱滅菌法**常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌抱子(Spores of Bacillus subtilis,如NCIMB 8058、ATCC 9372)。D值大于1.5min,每片活孢子數(shù)5×105~5×106個。去熱原驗(yàn)證時使用大腸埃希菌內(nèi)毒素(Escherichia coliendomn),加量不小于1000細(xì)菌內(nèi)毒索單位。 
(3)輻射滅菌法  輻射滅菌法**常用的生物指示劑為短小芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus pumilus,如NCTC 10327、NCIMB 10692、ATCC 27142)。每片活抱子數(shù)107~108,置于放射劑量25kGy條件下,D值約3kGy。但應(yīng)注意滅菌物品中所負(fù)載的微生物可能比短小芽孢桿菌孢子顯示更強(qiáng)的抗輻射力。因此短小芽孢桿菌孢子可用于監(jiān)控滅菌過程,但不能用于滅菌輻射劑量建立的依據(jù)。 
(4)氣體滅菌法  環(huán)氧乙烷滅菌**常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus subtilis,如NCTC 10073、ATCC 9372)。氣態(tài)過氧化氫滅菌**常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus steatothermophilus,如NCTC 10007、NCIMB 8157、ATCC 7953)。每片活孢子數(shù)1×106~5×106個。環(huán)氧乙烷滅菌中,枯草芽孢桿菌孢子D值大于2.5min,在環(huán)氧乙烷濃度為600mg/L,相對濕度為60%,溫度為54℃下滅菌,60min應(yīng)被殺滅。 
(5)過濾除菌法  過濾除菌法**常用的生物指示劑為缺陷假單胞菌(Pseudomonas diminuta,如ATCC 19146),用于濾膜孔徑為0.22μm的濾器;黏質(zhì)沙雷菌(Serratia  marcescens)(ATCC 1 4756)用于濾膜孔徑為0.45μm的濾器。 
 
 
 
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